The presence of periodontopathogens associated with the tumour necrosis factor-alpha expression in patients with different periodontal status / Presencia de periodontopatogenos asociados con expresión de factor-alpha necrosis tumoral - en pacientes con diferente estado periodontal

El propósito de este trabajo fue fue investigar la relación entreP. gingivalis, T. forsythia, T. denticola, P.intermedia, y A. actinomycetemcomitanspresentes en surcos y/o bolsas de pacientes con gingivitis (G), periodontitis crónica leve (MiCP), periodontitis crónica moderada (MoCP) y periodontitis severa (PS) y la expresi¨®n de TNF-¦Á en tejido gingival segun el estado clínico periodontal. Para ello se seleccionaron seis pacientes con G, 7 con MiCP, 23 con MoCP y 7 con PS. Los patogenos extraidos de los surcos y/o bolsas se identificaron mediante PCR con cebadores especificos para cada especie, Se detectó la expresión de TNF-¦Á en tejido gingival. Se registraron los siguientes parametros clinicos: profundidad al sondaje (PD), perdida de inserción clónica (CAL) y perdida de hueso. Se detectó P. gingivalis con la siguiente frecuencia: 16,6 por ciento en sujetos con G, 57,1 por ciento en MiCP, 57.8 por ciento en MoCP y 58.1 por ciento en PS (p < 0,05). P. intermedia no fue detectada en pacientes con G y A. actinomycetemcomitans fue solamenteidentificado en MoCP (31,5 por ciento) y PS (42.8 por ciento) T denticola y T. forsythia se identificaron en todos los grupos. Las combinaciones bacterianas P. denticola + P. intermedia y P. intermedia + T. forsythia se identificaron asociadas significativamente (p = 0,04, p =0,02) con la presencia de mRNA TNF-¦Á en 20 por ciento y 25 por ciento de los sujetos, respectivamente. P. gingivalis + A. actinomycetemcomitans y A. actinomycetemcomitans + T. forsythia se asociaron con valores de PD y CAL de gravedad. La asociación entre la presencia de P. intermedia y los niveles de expresi¨®n de TNF-¦Á fue significativa(p = 0,05). Estos resultados indican que la proporción de pacientes con P. gingivalis aumenta con la progresión de la enfermedad. Observamos que la presencia de P.intermedia desencadenaria la expresión de TNF-¦Á y provocaria un empeoramiento del estado clinico del paciente.

Producción de interferón gamma por linfocitos pas-positivos infiltrados en corazones de pacientes chagasicos en los sitos de lesiones / Interferon gamma production by pas-positive T Lymphocytes of chagastic patients infiltrated into human hearts in the sites of lesions

En sangre de chagásicos en trabajos previos se halló un número alto de linfocitos T productores de substancia P.A.S.- positiva, más numerosos en chagásicos con electrocardiograma anormal. Luego los hallamos infiltrados en el corazón chagásico. En este trabajo consideramos nuestra hipótesis de que esa substancia linfocitaria sería Interferongamma. Material y Métodos. Muestras de corazones de 8 chagásicos fallecidos por muerte cardiaca. Se utilizaron anticuerpos monoclonales anti-IFN gamma humano; para linfocitos T activados (CD45 ROJ, y la reacción del P.A.S, respectivamente. Las células positivas se contaron en 50 campos a 400x y el estado de miocardio se comparó con datos clínicos. También. en frotis de sangre de pacientes chagásicos con ECG anormal, investigamos inmunomarcación con anti interferon gamma y la P.A.S.-positividad, respectivamente. Resultados El mayor número de células infiltrantes intracardiacas (65-75%) resultaron positivos para IFN gamma, y similares valores para P.A.S.-positividad y para CD45 RO. En sangre hallamos 41 % ±7 de linfocitos P.A.S.-positivos: y similar de positivos para IFN-gamma. Conclusiones: Los datos muestran que los linfocitos P.A.S.-positivos de los chagásicos producen IFN-gamma tanto en sangre. Como infiltrados en tejidos cardíacos. e indican una fuerte respuesta T-helper l. También explican la gran afluencia de macrófagos en dichos tejidos cardíacos. No se vieron parásitos T. cruzi ni formas intracelulares. Esos hechos refuerzan los datos que indican existencia de autoinmunidad en Chagas. Abrimos una pregunta: ¿a que antígeno/s responden en el corazón chagásico los linfocitos T P.A.S.-positivos productores de IFN-gamma?

In the blood of chagasic patients, a high number of T-lymphocytes producers of a P.A.S.-positive substance was found, more numerous in chagasics with abnormal electrocardiogram. Further. We found such lymphocytes infiltrated in the chagasic heart. Here, we considered our hypothesis that those lymphocytes would be Interferon -gamma producer' cells. Material and Methods: Heart samples of 8 patients deceased due to chagasic heart disease (ChHD). Cuts of 5 microns were submitted to monoclonal antibodies for human Interferon-gamma; to CD45RO for activated T lymphocytes; and to the classical Periodic acid Schiff reaction (P.A.S.), respectively. In blood smears from chagasic patients with ChHD, the reactivity for anti Interferon gamma and for the P.A.S. reaction was compared, regarding the respective positive cell number. The myocardium status was compared with clinical date. Results: In hearts, 65-75% of infiltrated lymphocytes were positive for IFN-gamma; similar values were found, in seriated cuts, of P.A.S.-positive lymphocytes, as well as of CD45RO+. In blood, there were 41 % ±9 of P.A.S.positive lymphocytes, similar to positive cells for IFN-gamma. Conclusions: The data indicates that the P.A.S.-positive lymphocytes from chagasic patients are producers of IFN gamma in blood, as well as when infiltrated into the cardiac tissues. Such fact explains also the great affluence of macrophages in cardiac tissues in ChHD. The data indicate a strong response of T helper 1 type in this severe advanced stage of Chagas'disease. Either Trypanosome cruzi parasites or intracellular forms were seen in these hearts. This favours the data showing autoimmune mechanisms in this process. We open a question: to which antigen/s respond in the chagasic hearts the lymphocytes producers of IFN gamma?

Efecto de gangliosidos in vitro sobre linfocitos de pacientes chagasicos estimulados con mitogenos o con antigenos de corazón o cerebro / Gangliosides in vitro effects on lymphocytes from patients with chronic Chagas disease stimulated with mitogens or heart or brain antigens

Se estudió in vitro el efecto de gangliósidos sobre las respuestas de linfocitos de pacientes chagásicos estimulados con mitógenos o con antígenos de corazón y cerebro. La razón para efectuar este estudio fueron las evidencias que indican un rol de los linfocitos T en la producción de daños de la cardiopatía chagásica, y datos que indican que los gangliósidos pueden tener actividad sobre esas células. Además, en trabajos previos, hallamos que los linfocitos de chagásicos responden con transformación blástica (TB). Material y Métodos: se efectuaron cultivos de leucocitos de 14 pacientes chagásicos. A los cuales se adicionaron gangliósidos y en esas condiciones, se estimularon con mitógenos, o bien con antígenos de corazón humano o cerebro murino, respectivamente. Resultados: se observó inhibición parcial de la transformación blástica Inducida por mitógenos, y también hubo Inhibición parcial de la TB inducible por los antígenos de corazón o de cerebro en los linfocitos de chagásicos, siendo significativas las diferencias con respecto a los controles (p< 0.001). Conclusiones: se considera de Interés ese efecto inhibidor de gangliósidos sobre las actividades de los linfocitos de chagásicos estudiadas en estos experimentos, por ser directamente vinculables a factores de patogenia chagásica, que podrían ser Inmunomodulados.

In human Chagas'disease previous work has shown the occurrence of a T-lymphocyte CD4-positive population (a high producer of PAS-positive glycoproteins) with evidence suggesting a role in the formation of damages to the myocardium and neural structures in chagasic heart disease (ChHD). Other workers have taken such facts into consideration and have employed gangliosides (biological substances with neurotrophic and immunomodulatory properties) in chagasics with chronic cardiomyopathy and disautonomic signs, obtaining an Improvement in functional signs and a decrease in the number of PAS+ lymphocytes. In the present work we have studied the effect of mixed gangliosides (Cronassial on cell cultures of total leukocytes, or on mononuclear cells prepared through Ficoll-Hypaque. Blood was obtained from 14 patients with ChHD. Experiments were undertaken to assess the effect of policlonal mitogens Phytohaemagglutinin (Phy) and Concanavalin A (Con A) on blastic transformation, estimated by cell size and cytologic study. In addition, the production of PAS+ substances by the lymphocytes and blast were assessed. Gangliosides were added at final concentrations of 100 mg/ml or 200 mg/ ml. Cell viability was assessed by means of the Trypan blue test. With respect to blastic transformation, results showed a significant decrease in the cultures that received gangliosides 24 hours before mltogen administration, as compared with controls (p<0.001) (both for Phy and Con A). On the other hand, the production of lymphocytic PAS+ substances decreased in the cultures of chagasics in which gangliosides were added. Some of these results confirmed previous findings on the matter. The facts suggest that gangliosides can modulate some lymphocytic activities in chagasics.

Cardiopatía chagasica: identificación y cuantificación de células infiltrantes, en corazones de pacientes que sufrieron muerte cardiaca a distintas edades / Human chagasic cardiopathy: identification and quantification of intracardiac infiltrating cells, in patients died by cardiac failure at different ages

Esta investigación fue realizada para obtener datos nuevos sobre factores que intervendrían en la producción y progresión de la cardiopatía chagasica humana (CChH) con muerte por fallo cardíaco. Estudiamos muestras cardíacas de pacientes que murieron a edad temprana y más tardía. METODOS: Caracterizamos y cuantificamos los tipos de células infiltrantes mediante anticuerpos monoclonales; y con métodos histológicos clássicos. RESULTADOS: Hallamos intensa infiltración intracardíaca por linfocitos que reaccionaron con el anticuerpo para CD45RO que muestra linfocitos T activados (más de 70). Similar número mostró reactividad para subtipo CD4. Dichos linfocitos mostraron substancia PAS+ en citoplasma. Macrófagos fueron detectados en número superior a 25. Pocos linfocitos reaccionaron para CD8. Hubo un número muy bajo de linfocitos B. Otras células infiltradas fueron mastocitos intramiocárdicos, en número elevado. Cualitativamente, esos hallazgos fueron similares en los dos grupos de pacientes. Cuantitativamente, el número de linfocitos T y el de mastocitos fue significativamente mayor en los casos que sufrieron muerte temprana (p<0.001). No se observó T.cruzi. Se observaron daños en cardiomiocitos, con linfocitos T y macrófagos adheridos. CONCLUSIONES: Los hallazgos sugieren una activa e intensa existencia de mecanismos inmunocelulares en la producción y evolución de la CChH grave, en los que intervienen linfocitos T CD4+, con substancias PAS+, macrófagos, y mastocitos. Dichas células, mostraron citoadherencia a cardiomiocitos con lesiones; y por su ubcación y número asociáronse también a arritmias cardíacas malignas. En base a dichos hechos sugerimos que serían causas de pobre perfomance cardíaca en la CChH, y merecerían considerarse con respecto a estrategias terapéuticas

Estudio de esofago en pacientes chagasicos de cordoba, Argentina: histologico-inmunohistoquimico, y de tiempo de evacuacion / Esophagus study in patients with Chagas disease from Córdoba, Argentina. Histologic-immunohistochemical, and evacuation time

Com el objeto de establecer el estado del esófago en relación a la noxa chagásica en la región central de Argentina, estudiándolo en pacientes com Chagas, de diferentes edades, se investigó el tiempo de vaciamiento esófago (T.V.E.) así como su calibre, mediante una prueba radiologica estardardizada. Metodología: Se trabajó sobre una muestra de 87 pacientes com pruebas serológicas positivas para Chagas a los que se practicó TVE, en Hospital Rawson. El estudio se realizó retrospectivamente sobre los registros originales. Se consideró TVE retardado cuando se vió bario retenido en esófago mas allá de 1 minuto desde la ingesta. Como controles se utilizó el estudio de TVE efectuado en Hospital Rawson, a 120 personas com serologías negativas para Chagas. Por outra parte, se estudiaron mustras de esófago obtenidos mediante autopsias de pacientes chagásicos que fallecieron por cardiopatía o por otras causas (cuatro casos) del Hospital San Roque, Córdoba, y se efectuaron estudios mediante técnicas histológicas clásicas e inmunohistoquimicas. El 63 por ciento de los pacientes mostraron TVE retardado, en porcentajes crecientes com la edad. En el grupo control no chagásico, sólo el 3 por ciento furon positivos para TVE retardado. El interrogatorio mostró síntomas de disfunción esofágica en el 35 por ciento de los casos chagásicos. El número de megaesófagos fue bajo (tres), correspondientes al grado II. Los resultados histopatológicos mostraron infiltración de linfocitos T PAS +, en torno a estructuras neurales del plexo de Auerbach, y disminución del número de las mismas, en los tres casos. El músculo se vio conservado, aunque hubo también algunas áreas com infiltración T linfocitaria. Surge de los presentes resultados una alta incidencia de trastornos de la función esofágica en eestos pacientes chagásicos de Argentina (87 casos) reflejada en el TVE retardado, creciente com la edad. No obstante, el número de megaesófagos fue bajo y la dilatación de los mismos de grado 2. En el aspecto histopatológico, los casos estudiados mostraron evidencias compatibles com proceso chagásico. Se interpreta que en la producción de grandes megaesófagos frecuentes en outras regiones chagásicas, es posible que intervengan otros factores, en relación com las patologías geográficas.

Núcleos en anillos con segmentos finos en leucocitos neutrófilos humanos de personas sanas hallados mediante la reacción de Fulgen / Ring-shaped nuclei with fine segments in human neutrophils of health subjects by the Feulgen's reaction

Hemos efectuado un estudio sobre la morfología de los núcleos de leucocitos neutrófilos de personas sanas, coloreándolos mediante la reacción de Feulgen (RF) que utilizamos como coloracicon única de estos preparados. Extendidos sanguíneos de 75 jóvenes estudiantes de medicina fueron sometidos a la RF, y examinados. En todos los casos encontramos neutrófilos con núcleos en anillo conformados por três o cuatro áreas lobuladas completamente conectadas unas as otras, algunas de ellas por una fina banda de ácido desoxirribonucleico (ADN). El número de estos neutrófilos con núcleo en anillo fue alto: 15.9% ñ 11,2. A nuestro conocimiento, la existencia en humanos sanos de neutrófilos con núcleos en anillo no ha sido comunicada hasta ahora: nuestros hallazgos sobre existencia de núcleos en anillo con segmentos finos en neutrófilos, en todas las personas sanas aquí investigads, sugieren que esas células podrían ser una fase evolucionaria normal en el desarrollo de polimorfonucleares humanos